В 2005-ом году появляется метод, который получил название “технология 454” [3]. Этот метод способен за 4 часа прочитать 25 миллионов нуклеотидов с 99% точностью, то есть примерно в 100 раз эффективней технологии секвенирования по Сенгеру. Не вдаваясь во всех детали, хочется лишь отметить оригинальную идею, лежащую в основе метода. Целевую молекулу ДНК режут на части и пришивают к концам каждой молекулы последовательность, адаптер.   Один из праймеров, необходимых для ПЦР, прикрепляется в большом количестве к специальным шарикам диаметров в 44 микрометра (Рис. 3). Шарики смешиваются с ДНК, при этом молекула ДНК может прицепиться своим адаптером к праймеру. Шариков берется много, а ДНК мало, так что к каждому шарику прилипает только одна молекула целевой ДНК. Все это смешивается в масле для образования эмульсии: каждый шарик находится внутри капли воды, окруженный маслом. На каждом шарике с помощью ПЦР достраивают имевшиеся на нем праймеры и в итоге получают шарики, на каждом из которых множество копий одинаковых молекул ДНК. Шарики разливаются на специальный чип, имеющий лунки размером под один шарик. Таких лунок огромное количество. В каждой лунку добавляют по очереди нуклеотиды каждого типа. При присоединении нуклеотида выделяется пирофосфат, который используется специальной системой ферментов для создания свечения. Чем сильнее сигнал – тем больше одинаковых нуклеотидов шло подряд. Глядя за появлением свечения в каждой лунке можно с высокой точностью читать до 200 нуклеотидов. С помощью этого метода был прочитан геном Mycoplasma genitalium.

Технология 454: